Le but de cette étude était de mettre au point une méthode rapide, sensible et spécifique de quantification du thromboxane B2 (TXB2) par chromatographie liquide haute performance couplée à une interface d'ionisation électrospray et à une détection par spectrométrie de masse (CLHP-ESI-SM), à partir de microsomes de levure exprimant la thromboxane synthase (CYP5A1) humaine. Ce métabolite est le produit d'hydratation stable du thromboxane A2 (TXA2) produit par le CYP5A1 à partir de son substrat, la prostaglandine H2 (PGH2). La quantification du TXB2 a été réalisée à l'aide d'un standard interne deutéré, le 6-céto-PGF1α-d4, ajouté avant une extraction par le diéthyléther. La séparation chromatographique s'effectue en phase inverse sur colonne XTerra MS C18. L'élution est réalisée en mode isocratique (60 % acétonitrile contenant 0,05 % d'acide formique - 40 % tampon formiate d'ammonium 5 mM, pH 3,0). Le mode d'ionisation électrospray négatif a été retenu pour une meilleure détection du TXB2 et du 6-céto-PGF1α-d4. Cette technique appliquée avec succès aux microsomes exprimant le CYP5A1 sauvage montre une production croissante et linéaire de TXB2 pour la gamme de concentrations de PGH2 utilisée (0-120 μM). Cette méthode pourra être appliquée à l'analyse de l'activité enzymatique de nouveaux variants de la thromboxane synthase, récemment mis en évidence au laboratoire, et exprimés dans des microsomes de levure.