ObjectifDévelopper et valider une méthode de dosage de 16 antidépresseurs, 1 antipsychotique et de 8 métabolites dans le plasma (ou le sérum).Méthodes50 L de plasma, 50 L d’étalon interne (0,5 mg/L de trimipramine-D3 dans de l’eau) et 200 L d’un mélange 1:1 de méthanol et d’acétonitrile sont mélangés et incubés pendant 30 minutes à –20 °C. Après centrifugation, 100 L de surnageant est transféré et 1 L est injecté. Le système analytique consiste d’un UHPLC Thermo Ultimate 3000 couplé à un Thermo Q-Exactive. La colonne est une Thermo Accucore phényl hexyl 100 × 2,1 mm, 2,6 m. La phase mobile consiste en un gradient d’A (H2O, NH4HCOO 2 mM, 0,1 % HCOOH) et B (NH4HCOO 2 mM, MeOH/ACN 50/50, 0,1 % HCOOH, 1 % H2O), de 25 à 90 % en 7,5 minutes. La détection se fait en full-scan de m/z 150 à 500, avec entre 4 et 5 minutes fragmentation en mode multiplex pour différencier les isomères amitriptyline/maprotiline et nortriptyline/normaprotiline. Les calibrateurs sont ClinCal^®Tricyclic antidepressants Serum Calibrator Set (niveaux 0–3) et Chromsystems 3Plus1^®Multilevel calibrator set antidepressants extended et les contrôles ClinChek^®Serum Tricyclic antidepressants, et MassCheck^®Antidepressants 1/Extended. La méthode permet le dosage de 25 molécules: amitriptyline, clomipramine, clozapine, citalopram, désipramine, desméthylclozapine, desméthylcitalopram, desméthylclomipramine, desméthylmirtazapine, desméthylvenlafaxine, doxépine, duloxétine, fluoxétine, fluvoxamine, imipramine, maprotiline, mirtazapine, nordoxépine, norfluoxétine, norsertraline, nortriptyline, paroxétine, sertraline, trimipramine et venlafaxine. La validation a été effectuée selon les recommandations de l’agence Européenne des médicaments.RésultatsAucune interférence n’a été détectée dans 3 plasmas et 3 sérums de volontaires. Aucune contamination entre échantillons n’a été constatée. Les limites inférieures de quantification (LLOQ) variaient entre 0,5 (duloxétine) et 22,5 (norclomipramine) g/L. La répétabilité (4 concentrations,n = 5) variait entre 0,4 % et 9,1 % (médiane : 2,6 %). La fidélité intermédiaire (4 concentrations,n = 5) était en dessous de 10 % pour toutes les molécules (médiane : 2,90 %). La justesse était entre 85 et 115 % (80–120 % pour la limite inférieure de quantification) pour toutes les molécules testées. La linéarité était excellente (r² > 0,99 pour toutes les molécules testées, sauf l’amitriptyline et la norsertraline). L’effet de matrice variait entre 98 et 111 %, avec une médiane à 105 %, avec des coefficients de variation inter-sujets entre 2,4 et 10,1 % (médiane 5,6 %), sauf pour la norsertraline (136 et 76 %, variation inter-sujets (12,1 et 25 %). Toutes les molécules testées étaient stables pendant au moins 18 jours à 4 °C. A la température ambiante, toutes étaient stables pendant 8 jours, sauf la fluoxétine et la norfluoxétine (5 jours). Tous les composés étaient stables après 3 cycles de décongélation/congélation.ConclusionsLa méthode permet le dosage de 25 molécules sur un échantillon de 50 L de plasma ou de serum. Tous les critères de validation étaient satisfaits pour 24 molécules.