IntroductionLes ostéocytes jouent un rôle important dans l’homéostasie osseuse et le maintien de l’intégrité osseuse. Ces cellules, dérivées d’ostéoblastes, sont intégrées dans la matrice minéralisée et représentent > 95 % de toutes les cellules osseuses. Les ostéocytes sont interconnectés et forment un réseau avec les cellules à la surface de l’os (ostéoblastes, ostéoclastes) et avec le système vasculaire. La perte osseuse liée à l’âge résulte d’une réduction de la formation osseuse et est associée à une altération du réseau ostéocytaire. La capacité de l’os à s’auto-réparer est réduite et prédispose à l’ostéoporose et aux fractures. Des vésicules extracellulaires (VE) sont produites en permanence dans la matrice osseuse en réponse à de nombreux stimuli (charge mécanique, inflammation…). Les VE produites par les ostéocytes pourraient constituer un mécanisme sophistiqué de communication intercellulaire dans l’os qui contrôlerait le phénotype et l’activité des ostéoblastes et participerait à la régénération osseuse. Des dysfonctionnements de cette voie pourraient survenir avec le vieillissement altérant la quantité et la qualité osseuse.Matériels et méthodesLes VE ont été isolées d’os compact de souris jeunes et âgées, par centrifugation différentielle. La reproductibilité du protocole et la caractérisation des sous-types de VE ont été évaluées par MET (Microscopie Electronique à Transmission) et par TRPS (Tunable Resistive Pulse Sensing, qNano). La caractérisation fonctionnelle a été réalisée in vitro (modulation de la différenciation ostéoblastique des lignées cellulaires pré-ostéoblastique MC3T3-E1 et mésenchymateuse ST2) sur la base de l’activité enzymatique du marqueur de différenciation précoce des ostéoblastes ALP (phosphatase alcaline).RésultatsNous avons montré la robustesse de notre protocole d’extraction et de purification. Deux populations principales de vésicules ont été isolées du tissu osseux [200-230 nm (microvésicules) et 70-85 nm (exosomes)] avec une concentration moyenne d’environ 10 + 11 particules/ml. L’analyse MET a révélé des exosomes en forme de cupules typiques et une analyse préliminaire par Western-Blot a confirmé l’enrichissement en protéines spécifiques d’EV telles que CD9. Nos résultats indiquent que les deux types de VE (microvésicules et exosomes) ont un effet-dose inducteur sur l’activité ALP. De plus seules les VE extraites d’os de souris jeunes sont capables d’augmenter l’activité ALP, celles issues de souris âgées n’ayant aucun effet à la concentration utilisée.ConclusionNous présentons la première preuve que des VE peuvent être isolées à partir d’os compact de souris, que ces VE affectent la différenciation ostéoblastique et que cet effet varie au cours du vieillissement.