Clonage, expression et caractérisation de gp160 du VIH-1, portant des délétions partielles ou totales dans la boucle V3.
Auteurs : Lavallée C1, Thibodeau LDans le but de mieux comprendre le rôle de la boucle immunodominante V3 dans la spécificité de la réponse immunitaire et afin de déterminer si celle-ci joue un rôle dans la pathogenèse associée à l'infection par le VIH, notamment l'induction de l'apoptose dans les cellules CD4+, nous avons introduit 2 modifications dans le gène env de pNL4-3 : une délétion partielle dans la séquence de V3, en ne conservant que le motif consensus non variable GPGRAF ainsi que les 2 cystéines à la base de la boucle V3 (envΔV3-GPGRAF), et une délétion complète de la boucle V3, plus 43 nucléotides dans C3 (envΔV3+). Ces gènes modifiés et le gène env non modifié ont été clonés et exprimés dans un système baculoviral. L'analyse par immuno-empreinte a montré que les 2 protéines modifiées dans V3 réagissaient avec un sérum de référence humain anti-VIH au même niveau que la gp160 recombinante non modifiée. Contrairement à la gp160 non modifiée et à envΔV3-GPGRAF, la protéine ΔV3+ s'est montrée incapable de s'attacher à la molécule CD4, bien que V3 ne soit pas directement impliqué dans l'attachement au récepteur. Ces constructions seront très utiles pour déterminer le potentiel des glycoprotéines modifiées dans V3 à induire des anticorps capables de neutraliser des souches divergentes, ainsi que pour déterminer si V3 joue un rôle dans certains aspects de la pathogenèse, notamment l'induction de l'apoptose.