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Génotypage HLA-DQ par une technique modifiée de RFLP-PCR: application au gène HLA-DQA1.

Auteurs : Haras D1, Piperi MH, Cucchi-Mouillot P
Affiliations : 1Université de Corse, faculté des sciences et techniques, laboratoire de biologie moléculaire appliquée, Corte, France.
Date 1995 Septembre, Vol 318, Num 9, pp 977-84Revue : Comptes rendus de l'Académie des sciences. Série III, Sciences de la vieType de publication : article de périodique; subvention de recherche ne provenant pas du gouvernement américain;
Résumé

Depuis 1989, plusieurs méthodes de typage allélique du gène HLA-DQA1 par RFLP-PCR ont été publiées. Ces méthodes nécessitent la coupure totale des produits de PCR, particulièrement pour les hétérozygotes et l'observation de la taille de fragments de restriction spécifiques. La méthode de typage HLA-DQA1 par RFLP-PCR présentée ici nécessite seulement une étape d'amplification, la coupure du produit d'amplification par 8 enzymes de restriction et une électrophorèse en gel de polyacrylamide. La stratégie de typage consiste à répartir l'ensemble des génotypes homo- et hétérozygotes en 19 groupes de combinaisons d'allèles, sur l'observation de la coupure ou l'absence de coupure après action des enzymes ApaLI, HphI, BsaJI, FokI et MboII. L'attribution du génotype, dans chaque groupe de combinaison d'allèles, est due à l'observation de fragments de restriction de tailles spécifiques obtenus par l'action des enzymes MnlI, DdeI et RsaI. Nous pouvons ainsi discriminer 8 des 13 allèles HLA-DQA1, soit 36 des 91 génotypes possibles. Quatre à 8 génotypes peuvent ainsi être attribués par jour, l'extraction d'ADN incluse. La stratégie développée a l'avantage de permettre un contrôle interne de l'activité des endonucléases et de prendre en compte de nouveaux allèles sans modifier le protocole expérimental. Enfin, ce protocole peut être facilement mis en place dans un laboratoire de routine sans acquisition de matériels ou de réactifs spécifiques.

Mot-clés auteurs
Allèle; Antigène histocompatibilité classe II; Génotype; Homme; Locus HLA-DQ; Méthode; Polymorphisme longueur fragment restriction; Polymorphisme; Réaction chaîne polymérase; Typage;
 Source : PASCAL/FRANCIS INIST
 Source : MEDLINE©/Pubmed© U.S National Library of Medicine
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Citer cet article
Haras D, Piperi M H, Cucchi-Mouillot P. Génotypage HLA-DQ par une technique modifiée de RFLP-PCR: application au gène HLA-DQA1. C. R. Acad. Sci. III, Sci. Vie. 1995 Sep;318(9):977-84.
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Dernière date de mise à jour : 23/08/2017.


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