Fluorimétrie en temps retardé: principe et applications en biologie clinique.
Auteurs : Gaillard O1, Kapel N, Galli J, Delattre J, Meillet DLa fluorimétrie en temps retardé est une technique de dosage utilisant les propriétés de la fluorescence émise par les lanthanides. Cette fluorescence dite en temps retardé se caractérise par un pic d'émission très étroit, de longueur d'onde bien distincte de celle de la lumière d'excitation et par un déclin d'émission très long dans le temps. Ces caractéristiques permettent ainsi d'éviter les interférences rencontrées avec les fluorophores classiques: bruit de fond dû à l'autofluorescence des protéines présentes dans l'échantillon et à la dispersion de la lumière. L'utilisation de cette fluorescence dans les techniques de fluorimétrie en temps retardé concerne surtout l'europium et ses chélates. Ces techniques comportent le marquage par l'europium d'antigènes ou d'anticorps selon qu'elles sont par compétition ou de type extraction-saturation. Ce marquage est suivi de l'immunodosage proprement dit avec mesure de la fluorescence lors de l'étape de révélation. Les avantages de ces techniques sont nombreux: large domaine de mesure, grande sensibilité de détection. non interférence de la turbidité de l'échantillon, bonne praticabilité du marquage de molécules par l'europium et des immunodosages. Les applications en biologie clinique sont variéestant en analyse courante que dans le domaine de la recherche. L'utilisation de sondes «froides» marquées par l'europium et la possibilité d'analyses multiples au cours d'une même séquence analytique ouvrent des perspectives très prometteuses.