L’infection congénitale à cytomégalovirus (CMV) est la première cause de handicap neurosensoriel d’origine infectieuse. La présence de CMV dans les urines au cours des deux premières semaines de vie permet d’établir le diagnostic d’infection congénitale à CMV. La culture des urines est la technique de référence, cependant la PCR, plus sensible et plus rapide pour le rendu des résultats devient une technique de choix. L’objectif de cette étude est la validation de la technique de détection du CMV dans les urines par PCR en temps réel avec la trousse Abbott RealTime CMV sur automate m2000. La répétabilité, la reproductibilité, la limite de détection et la contamination inter-échantillon ont été évaluées. Des échantillons urinaires de patients (n = 141) ont été analysés simultanément en culture et en PCR afin d’évaluer la concordance de ces deux techniques. La sensibilité et la spécificité de la PCR ont été calculées. La technique de PCR en temps réel Abbott RealTime CMV dans les urines est une technique automatisée et sensible (limite de détection 200 UI/mL). La fidélité est très bonne (écart type de répétabilité : 0,08-0,15 LogUI/mL et de reproductibilité : 0,18 LogUI/mL). Il existe une très bonne concordance entre la culture et la PCR en temps réel Abbott RealTime CMV (kappa 0,96). La sensibilité (100 %) et la spécificité (98,2 %) de la PCR en prenant la culture pour référence sont très bonnes. La PCR en temps réel avec la trousse Abbott RealTime CMV sur automate m2000 est une technique à privilégier pour la détection du CMV dans les urines.