Viabilité et état de différenciation des hépatocytes humains immunoprotégés par macroencapsulation et transplantés chez le rat.
Auteurs : Nicoluzzi JE1, Barbu V, Baudrimont M, Lakehal F, Becquemont L, Chafaï N, Delelo R, Sarkis R, Honiger J, Housset C, Balladur PObjectif - Déterminer le délai de survie et l'état de différenciation des hépatocytes humains immunoprotégés par macroencapsulation et transplantés chez le rat sans immunosuppression. Méthodes - Des hépatocytes humains ont été isolés, encapsulés dans des fibres creuses et transplantés dans la cavité péritonéale de rats immunocompétents. Aux temps J3, J7 et J14 suivant la transplantation, les fibres ont été explantées. Les caractères morphologiques en microscopie optique et électronique et l'expression des gènes ont été comparés à ceux des hépatocytes encapsulés non transplantés (J0). Les ARNm des cytochromes P450 3A et de l'albumine humaine ont été quantifiés par Northern blot. Les protéines cytochromes P450 3A ont été détectées par Western blot et leur activité enzymatique mesurée par dosage du métabolite 6β-hydroxylé de la testostérone en chromatographie liquide haute performance. Résultats - Les hépatocytes conservaient une viabilité supérieure à 60 % et des critères morphologiques de différenciation jusqu'à J7. Les transcrits de l'albumine et des cytochromes P450 3A étaient détectables jusqu'à J14. A J3 et à J7, les transcrits de l'albumine étaient de l'ordre de 30 % par rapport à JO tandis que ceux du cytochrome P450 3A4 et du cytochrome P450 3A5 étaient respectivement de 0 et de 65 %. Les protéines cytochromes P450 3A étaient détectées par Western blot jusqu'à J14 et leur activité 6β-hydroxylase était de 17 % dès J3 par rapport à J0, en accord avec une disparition des ARNm du cytochrome P450 3A4. Conclusions - Il est possible de maintenir en survie à court terme des hépatocytes humains encapsulés et transplantés chez le rat. D'autres conditions expérimentales visant à prévenir ou à ralentir la diminution d'expression des gènes de différenciation hépatocytaire sont à explorer.